中文简体
Właśnie uruchomiłeś metodę gradientową, która działała idealnie w zeszłym tygodniu. Wzorce kalibracyjne wyglądają na czyste, ale chromatogram próbki pokazuje dodatkowy pik po 23,8 minucie. Wymieniasz kolumnę, przygotowujesz świeży bufor i sprawdzasz detektor. Szczyt nadal tam jest. Następnie wymieniasz wodę przechodzącą w fazę ruchomą, a artefakt znika. Taka jest rzeczywistość wysokosprawnej chromatografii cieczowej: czystość wody kryje się za każdym rozdziałem, a gdy się zmienia, zmienia się wraz z nią metoda.
Czystość wody wpływa na jakość danych HPLC na cztery praktyczne sposoby: stabilność linii bazowej, kształt piku, odtwarzalność retencji i żywotność urządzenia. Zanieczyszczeniami mogą być cząsteczki organiczne, rozpuszczone jony, cząstki lub drobnoustroje. Nawet niewielka ilość jednego rodzaju zanieczyszczeń może wywołać skutki nieproporcjonalne do jego stężenia.
Główne skutki czystości wody na HPLC
W systemie HPLC woda jest odczynnikiem, a nie pasywnym tłem. Przenosi bufor, rozpuszcza próbkę i tworzy tło detektora. Zanieczyszczenia w wodzie przedostają się zatem bezpośrednio do sygnału analitycznego. Poniższa tabela podsumowuje najczęstsze zanieczyszczenia i ich skutki.
| Zanieczyszczenie | Przykłady lub źródło | Efekt w HPLC |
|---|---|---|
| Rozpuszczone substancje organiczne | Substancje humusowe, plastyfikatory, pozostałości po czyszczeniu, opary rozpuszczalników | Piki duchów pochłaniające promieniowanie UV, dryf linii bazowej, zmiany retencji |
| Jony nieorganiczne | Sód, chlorek, krzemian, metale śladowe | Zmiany przewodności, zakłócenia w chromatografii jonowej i LC-MS, poszerzenie pików związane z metalem |
| Cząsteczki | Drobne cząstki żywicy, pyły, wytrącenia | Zablokowane fryty, rosnące przeciwciśnienie, zużycie uszczelnienia pompy, zaszumiona linia bazowa |
| Rozpuszczone gazy | Tlen, dwutlenek węgla, azot | Pęcherzyki w detektorze, skoki linii bazowej, dryf pH |
| Mikroorganizmy | Bakterie i biofilmy w pojemnikach do przechowywania | Zanieczyszczenie kolumny, zatkane fryty, fałszywe piki, niestabilność metody |
Efekty te nie mają wyłącznie charakteru teoretycznego. Biofilm drobnoustrojów w zbiorniku wodnym może uwalniać metabolity pochłaniające promieniowanie UV, a gdy ten film się utworzy, zwykła wymiana wody może nie rozwiązać problemu, dopóki zbiornik nie zostanie oczyszczony i odkażony.
Co właściwie oznacza „stopień HPLC” i woda typu 1?
Większość metod analitycznych wymaga wody spełniającej specyfikacje typu 1. W praktyce oznacza to, że rezystywność w temperaturze 25 stopni Celsjusza wynosi około 18,2 megaomów centymetra, przewodność jest bliska 0,055 mikrosiemensa na centymetr, a całkowity węgiel organiczny jest na tyle niski, że woda nie tworzy widocznego tła UV lub MS. Sama rezystancja nie wystarczy. Należy także znać poziom TOC, liczbę cząstek oraz, w niektórych zastosowaniach, zawartość krzemianów i sodu.
Wartość pH oczyszczonej wody nie jest użyteczną specyfikacją. Ultraczysta woda prawie nie ma zdolności buforowania i szybko pochłania dwutlenek węgla z powietrza, więc zmierzone pH około 5,6 odzwierciedla po prostu rozpuszczony CO2. Znaczenie pH to pH buforowanej fazy ruchomej, którą przygotowujesz.
Wymagania dotyczące jakości wody zależą również od czujnika. Detekcja UV przy 210 nm jest szczególnie wrażliwa na zanieczyszczenia organiczne, ponieważ absorbuje tam wiele wiązań węgiel-tlen i węgiel-azot. LC-MS wymaga wody o bardzo małej zawartości nielotnych zanieczyszczeń, aby uniknąć supresji jonów i tworzenia adduktów. Na detektory wyparne w podobny sposób wpływają zanieczyszczenia nielotne, ponieważ zwiększają one sygnał tła. Woda typu 1 jest zatem dobrym punktem wyjścia dla prawie każdego zastosowania HPLC.
Woda butelkowana klasy HPLC może być skuteczna, ale należy ją odpowiednio przechowywać i obchodzić się z nią. Sprawdź świadectwo analizy, zapisz numer partii i nigdy nie zakładaj, że stary pojemnik jest wolny od narośli biologicznych.
Elucja gradientowa sprawia, że zanieczyszczenia wody stają się widoczne
Zanieczyszczenia wody są najbardziej widoczne w metodach gradientowych. W badaniu izokratycznym substancja zanieczyszczająca pochłaniająca promieniowanie UV może po prostu nieznacznie podnieść wartość bazową. W gradiencie frakcja wodna zaczyna się od wysokiej, a frakcja rozpuszczalników organicznych wzrasta z czasem. Zanieczyszczenia można zatrzymać na szczycie kolumny, a następnie wymyć w miarę wzrostu zawartości substancji organicznych. Powoduje to powstawanie duchowych pików i dryfującej linii bazowej, które mogą zakłócać integrację i oznaczanie ilościowe.
Dlatego też pusty gradient jest jedną z najprostszych metod kontroli jakości wody. Przeprowadź dokładny gradient bez wstrzykiwania próbki. Jeśli w ślepej próbie pojawią się piki, podejrzana jest faza ruchoma.
Codzienne nawyki chroniące czystość wody
Czysta woda nie pozostaje czysta przez przypadek. Poniższe nawyki zapobiegają najczęstszym problemom w praktyce HPLC.
- Używaj wody z systemu oczyszczania ze świeżymi wkładami, działającą lampą UV i regularnie dezynfekuj.
- Zbierz wodę do czystego, zamkniętego pojemnika. Nie pozostawiaj otwartego pojemnika podczas pracy systemu.
- Nie przechowuj wody przez kilka dni. W miarę możliwości przygotować fazę ruchomą ze świeżą wodą tego samego dnia.
- Unikaj dodawania świeżej wody do częściowo napełnionego zbiornika. Wymień zawartość zbiornika zamiast ją uzupełniać.
- Przeprowadź pusty gradient przy długości fali używanej do analizy i zapisz wynik.
- Dokumentuj oporność, TOC i datę pobrania wody w swoich zapisach analitycznych.
W przypadku laboratoriów korzystających z wody butelkowanej obowiązują te same zasady. Sprawdź datę ważności, zamknij pojemnik bezpośrednio po użyciu i nie wlewaj niewykorzystanej wody ze zlewki do butelki.
Dodatki zmieniają problem wody w problem metody
Fazy ruchome rzadko zawierają samą wodę. Sole buforowe, kwasy, odczynniki par jonowych i niektóre specjalistyczne modyfikatory dodaje się w stosunkowo niskich stężeniach. Jeśli woda zawiera śladowe zanieczyszczenia pochłaniające promieniowanie UV, zanieczyszczenia te mogą nie zmienić pojemności bufora, ale nadal mogą pojawić się w sygnale detektora.
Ciecze jonowe są czasami stosowane jako modyfikatory fazy ruchomej w celu poprawy kształtu piku lub selektywności. Wybierając jeden, powinien obowiązywać ten sam standard czystości. Na przykład Tetrafluoroboran 1-etylo-3-metyloimidazoliowy jest powszechną cieczą jonową do badań chromatograficznych. Należy go rozpuścić w wodzie spełniającej już specyfikacje typu 1; w przeciwnym razie dodatek stanie się kolejnym źródłem zanieczyszczenia. Jeśli chcesz zrozumieć właściwości związane z separacją tych związków, nasz przegląd działania cieczy jonowych w procesach separacji obejmuje zmienne praktyczne.
CAS:143314-16-3 -1 -Dostawca płynów tetrafluoroboranu etylo-3-metyloimidazoliowego Technologia Ldet to chiński zwyczaj CAS: 143314-16-3 -1-Etylo-3-metyloimidazoliowy dostawca płynów tetrafluoroboranowych i 1-etylo-3-metyloim... Zobacz produkt → Czystość zaczyna się od dostawcy
W Zhejiang Ldet produkujemy ciecze jonowe i specjalistyczne chemikalia. Z produkcji wiemy, że śladowe zanieczyszczenia w materiale wyjściowym mogą zmienić wydajność na dalszym etapie procesu. Dlatego przed wypuszczeniem sprawdzamy zawartość wody, resztkowe halogenki i zachowanie się w promieniach UV. Ta sama dyscyplina obowiązuje w laboratorium HPLC: wybieraj materiały o udokumentowanych specyfikacjach. Na przykład Tetrafluoroboran 1-butylo-3-metyloimidazoliowy jest dostępny z danymi o czystości, które pozwalają ocenić, czy jest on zgodny z Twoją metodą wykrywania.
CAS: 174501-65-6-1-butylo-3-metyloimidazoliowy tetrafluoroboran płynny Dostawcy Technologia Ldet to chiński zwyczaj CAS: 174501-65-6-1-butylo-3-metyloimidazoliowy tetrafluoroboran dostawców cieczy i 1-butylo-3-metyloimid... Zobacz produkt → Co sprawdzić w certyfikacie analizy
- Resztkowa zawartość halogenków, ponieważ halogenki mogą wpływać na separację jonowymienną i korozję.
- Zawartość wody, ponieważ woda zmienia efektywne stężenie dodatku.
- Widmo UV lub wartość odcięcia UV, dzięki czemu można przewidzieć absorbancję tła.
- Spójność między partiami, ponieważ nowa partia nie powinna po cichu zmieniać Twojej metody.
Jeśli potrzebujesz pomocy w dopasowaniu materiału do metody, możesz to zrobić omów dane dotyczące czystości i niestandardowe wymagania z naszym zespołem technicznym .
Uzdatnianie wody jako część metody
Czystość wody w HPLC nie jest konfiguracją jednorazową. Jest to zmienna dzienna, która może zmieniać się w zależności od pory roku, butelki do przechowywania i stanu systemu oczyszczania. Użyj wody typu 1, potwierdź TOC i rezystywność, obchodź się z nią właściwie i wybieraj dodatki umożliwiające identyfikację. W metodzie opartej na nanogramach analitu woda nigdy nie jest „tylko wodą”.
